生化試劑-CD4細(xì)胞分選磁珠

產(chǎn)品信息 

生化試劑-CD4細(xì)胞分選磁珠 可用于對(duì)細(xì)胞進(jìn)行磁性標(biāo)記。標(biāo)記后，將細(xì)胞懸液加載到分選柱上，該柱放置在含分選器的磁場(chǎng)中。 磁性標(biāo)記的CD4+細(xì)胞被保留在柱內(nèi)。未標(biāo)記的細(xì)胞貫穿其中而被去除。將分選柱從磁場(chǎng)中移除之后，洗脫磁性標(biāo)記的CD4+細(xì)胞作為陽性選擇的細(xì)胞。

 · 高磁珠結(jié)合力 

·  簡(jiǎn)便、快捷

 ·  高純度、高得率、高活率

使用方法

試劑和儀器要求

1.緩沖液: （pH7.2 PBS、0.5% BSA、2 mM EDTA，2-8C)。

2.分選柱和分選器

3.(可選)用于流式細(xì)胞術(shù)分析的熒光偶聯(lián)CD4抗體。

4.(可選)PI(碘化丙啶)或7-AAD 用于流式細(xì)胞術(shù)排除死亡細(xì)胞。

5.(可選)預(yù)分離過濾器用于去除細(xì)胞團(tuán)塊。

操作步驟

一、樣本準(zhǔn)備

當(dāng)處理抗凝的外周血液時(shí)，應(yīng)通過密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞(PBMC)。

在處理組織時(shí)，用標(biāo)準(zhǔn)的制備方法制備單細(xì)胞懸浮液。

二、磁珠標(biāo)記

1.細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.300g 離心10min，去除上清。

3.每 10?細(xì)胞，用80μL緩沖液重懸。

4.每 10?細(xì)胞，用20μLCD4磁珠混勻。

5.(2-8)℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育時(shí)間;如果是常溫孵育，會(huì)增加非特異結(jié)合)。

6.(可選)加入染色抗體，在2-8℃避光孵育5分鐘。

7.每10?細(xì)胞，加入1-2mL緩沖液洗滌，300g離心10min，棄上清。

8.用 500μL 緩沖液重懸細(xì)胞。

三、磁性分選

1.將分選柱放置在分選器的磁場(chǎng)中。

2.將分選柱中加入適量緩沖液，充分濕潤(rùn)分選柱（xM: 500μL；xL: 3 mL）

3.將細(xì)胞懸液加到分選柱中。

4.結(jié)合磁珠的細(xì)胞會(huì)被吸附到分選柱上，沒有結(jié)合的細(xì)胞會(huì)順著液體流下來。加適量的緩沖液，待液體全部流盡，再加入適量緩沖液，一共洗3次。收集總流出物。這是未標(biāo)記的細(xì)胞。（xM: 3X500μL；xL: 3x3mL）

5.將分選柱從分選器中取出，并將其放在合適的收集管上。

6.加適量的緩沖液到分選柱中，迅速用塞子推下，得到就是目的細(xì)胞。（xM: 1mL；xL: 5 mL）

7.(可選)為了提高標(biāo)記細(xì)胞的純度，洗脫部分可以在第二個(gè)xM或xL柱上富集。使用新的分選柱重復(fù)步驟1至6中描述的磁選過程。

保存方法

在2-8℃條件下避光保存，請(qǐng)勿冷凍。有效期見試劑外標(biāo)簽。

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