天根DNA純化膠回收試劑盒

天根DNA純化膠回收試劑盒 DP214

產品簡介：

本試劑盒采用緩沖體系和離心吸附柱，既可從TAE 或TBE 瓊脂糖凝膠中回收DNA 片段，又可用于直接純化PCR 產物，能夠滿足多種實驗需要。溶膠液PC 中含有pH 指示劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠狀態(tài)。使用本產品可回收100 bp- 8 kb 大小的DNA 片段，回收率 可達80%。使用本試劑盒回收的DNA 可直接用于連接、轉化、酶切、測序等分子生物學實驗。

產品特點：

■ 兼容性強：既可用作DNA 產物直接純化，又可用作DNA 凝膠回收。

■ 操作簡便、可回收膠體積大：可按照膠塊與溶膠液等比進行溶膠。

■ 穩(wěn)定、可靠：配有指示劑，可直觀判斷影響DNA 吸附的pH 值，又可判斷DNA 與膜是否充分結合，提高回收效率。

天根DNA純化膠回收試劑盒 DP214

產品組成：

DP214-02 (50 preps)：

溶液PC(Buffer PC) 25 ml

平衡液BL(Buffer BL) 30 ml

漂洗液PW(Buffer PW) 15 ml

洗脫緩沖液EB(Buffer EB) 15 ml 

吸附柱CB2(Spin Columns CB2)50個 50個 5 個

收集管(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切膠器(Gel Cutter) 。

DP214-03 (200preps)：

溶液PC(Buffer PC) 100 ml

平衡液BL(Buffer BL) 120 ml

漂洗液PW(Buffer PW) 50 ml

洗脫緩沖液EB(Buffer EB) 30 ml 

吸附柱CB2(Spin Columns CB2) 200個 200個 20個

收集管(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切膠器(Gel Cutter) 。

天根DNA純化膠回收試劑盒 DP214

儲 存 條 件

 該試劑盒所有組分置于室溫(15-30℃)干燥條件下，可保存12個月。若溶液產生沉 淀，使用前可在37℃水浴中預熱10min以溶解沉淀，不影響效果。

產 品 簡 介

本試劑盒采用離心吸附柱，既能從TAE或TBE瓊脂糖凝膠中回收DNA片段，又 能用于直接純化PCR產物，滿足多種實驗需要。溶液PC中含有pH指示劑，可根據(jù)顏色來 判斷溶膠或PCR產物回收是否達到最佳狀態(tài)。使用本產品可回收100 bp-8 kb大小的DNA 片段，回收率可達80%,大于8 kb的DNA片段純化建議使用我公司的瓊脂糖凝膠回收試劑 盒DP208/209或DNA產物純化試劑盒DP203/204。每個離心吸附柱每次可吸附的DNA量為 10   μg。

使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、 連接和轉化等實驗。

注 意 事  項    請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。

1. 平衡液BL的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，消除高溫 /潮濕或其他不良環(huán)境因素對吸附柱造成的影響。使用前請先檢查平衡液BL是否出現(xiàn)渾 濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。

2. 溶液PC含有pH指示劑，為黃色，指示pH≤7.5。

天根試劑盒-DNA純化膠回收試劑盒-DP214操 作 步 驟

使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。

一 、從 瓊 脂 糖 凝 膠 中 回 收 D N A 片 段

1. 柱平衡步驟：向吸附柱CB2中(  吸附柱放入收集管中) 加入500μl平衡液BL,12 .000 rpm  (~13.400×g )離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。   （請 使 用 當天處理過的柱子)

2. 將單 一 的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下 l盡量切除多余部分) 放入干凈的離心管 中，稱取重量。

注意：使用切膠器(OSE-GC)切膠時，切膠器口對準瓊脂糖凝膠中

的DNA條帶下壓切割。切膠完成后，推動中心桿，將膠塊推入干凈

的離心管中。根據(jù)凝膠膠孔寬度可進行單次和連續(xù)切割。

3. 向膠塊中加入等倍體積溶液PC(如果凝膠重為0.1 g,其體積可視為100 μl,則加入100 μl PC溶液。使用切膠器切割1%的瓊脂糖凝膠，單塊重量約為0.06 g,實際膠塊重量與凝膠 濃度及厚度相關),50℃水浴放置10 min左右，其間不斷溫和地上下翻轉離心管，以確 保膠塊充分溶解。  ( 若膠塊的體積過大，可事先將膠塊切成碎塊)

注意：對于回收<150 bp的小片段可將溶液PC的體積增加到3倍以提高回收率；膠塊溶解后最好將溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在室溫時結合DNA的能力較強。凝膠融解后應呈現(xiàn)黃色，即可進行后續(xù)操作。如果膠融解后溶液的顏色為桔紅色 或紫色，請使用10 μl 3M乙酸鈉(pH 5.0)將溶液的顏色調為黃色后再進行后續(xù)操作。

(溶液PC中含有pH指示劑，當pH≤7.5時溶液的顏色為黃色，此時DNA才能夠有效的與 膜結合，當pH值偏高時溶液的顏色變?yōu)榻奂t色和紫色，需要進行調整。)

4. 將上一 步所得溶液加入一個吸附柱CB2中( 吸附柱放入收集管中) ,12,000  rpm(~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中。

5. 向吸附柱CB2中加入600 μl漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇) ,12.000  rpm (~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中。

注意：如果回收的DNA是用于鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議PW 加入后靜置2-5 min再離心。

6. 重復操作步驟5

7. 將吸附柱CB2放入收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,盡量除去漂洗液。將 吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，晾干。

注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(酶切、PCR等)實驗。

8. 將吸附柱CB2放入一個干凈離心管中， 向吸附膜中間位置懸空滴加適量) 的洗脫緩沖液 EB,    (如果回收的目的片段>4 kb,則洗脫緩沖液EB應置于65-70℃水浴預熱),室溫放 置2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,收集DNA溶液。

注意：洗脫液的體積不應少于30  ,體積過少會影響回收的效率。洗脫 液的pH值對于 洗脫效率有較大影響。若后續(xù)做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5  范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。為

1  了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,將DNA溶液收集到離心管中。

二 、 從 P C R 反 應 液 或 酶 切 反 應 液 中 回 收 D N A

1. 柱平衡步驟：向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500 μl的平衡液BL,12,000 rpm (~13,400×g )離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。(請使用 當天處理過的柱子)

2. 估計PCR反應液或酶切反應液的體積，向其中加入等倍體積溶液PC,充分混勻(無需去 除石蠟油或礦物油)。

注意：對于回收<150 bp的小片段可將溶液PC的體積增加到3倍以提高回收率；溶液混勻 后應呈現(xiàn)黃色，即可進行后續(xù)操作。如果溶液的顏色為桔紅色或紫色，請使用10 μl 3M乙 酸鈉(pH 5.0)將溶液的顏色調為黃色后再進行后續(xù)操作。

3. 將上 一 步所得溶液加入 一 個吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),室溫放2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中。

注意：吸附柱容積為800 μl,若樣品體積大于800p可分批加入。

4. 向吸附柱CB2中加入600 ul漂洗液PW (使用前請先檢查是否已加入無水乙醇) ,12.000   rpm (~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中。

注意：如果純化的DNA是用于鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議PW 加入后靜置2-5 min再離心。

5. 重復操作步驟4.

6. 將吸附柱CB2放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,盡量除去漂洗液。將 吸附柱CB2置于室溫放置數(shù)分鐘，晾干。

注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(酶切、PCR等)實驗。

7. 將吸附柱CB2放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量的洗脫緩沖液

EB,(如果回收的目的片段>4 kb,則洗脫緩沖液EB應置于65-70℃水浴預熱),室溫放

置2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min收集DNA溶液。

注意：洗脫液的體積不應少于30  μl,體積過少會影響回收的效率。洗脫液的pH值對于 洗脫效率有較大影響。若后續(xù)做測序，需使用ddH?O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-

8.5范圍內，且DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。為了提高DNA的回收量，可將 離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)離  心2 min,將DNA溶液收集到離心管中。