CD4 磁珠是一種用于對細(xì)胞進(jìn)行磁性標(biāo)記的工具，可以有效地分離和純化CD4+細(xì)胞。該方法具有高磁珠結(jié)合力，操作簡便快捷，能夠獲得高純度、高得率和高活率的CD4+細(xì)胞。 使用CD4磁珠進(jìn)行磁珠分選的方法如下：
一、樣本準(zhǔn)備
1. 處理抗凝的外周血液: 使用密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞(PBMC)。將外周血液樣本緩慢均勻地加入離心管中，疊加上相同體積的離心液。以1000g的速度離心20分鐘。將上清液去除，并輕輕將PBMC層轉(zhuǎn)移至新的離心管中。添加適量的緩沖液使得體積增加至所需的體積。
2. 處理組織: 使用標(biāo)準(zhǔn)的方法制備組織的單細(xì)胞懸浮液。先將組織切碎并轉(zhuǎn)移到含有蛋白酶等消化酶的緩沖液中。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的消化時(shí)間和溫度。消化完畢后，將組織塊過濾去除，并用緩沖液洗滌細(xì)胞沉淀。
二、磁珠標(biāo)記
1. 細(xì)胞計(jì)數(shù): 使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀準(zhǔn)確計(jì)算細(xì)胞數(shù)量。
2. 離心: 將細(xì)胞離心300g，離心時(shí)間為10分鐘，以去除上清液。
3. 重懸: 對于每1億細(xì)胞，使用80μL緩沖液將細(xì)胞重懸。
4. 磁珠添加: 對于每1億細(xì)胞，使用20μL的CD4磁珠將其加入細(xì)胞懸液中。輕輕混合使磁珠均勻分散。
5. 孵育: 將細(xì)胞懸液和磁珠混合物在2-8℃的環(huán)境中冰上或冰箱中孵育15分鐘。如果在冰上孵育，需要延長孵育時(shí)間。這一步驟是為了讓CD4磁珠與目標(biāo)細(xì)胞結(jié)合。
6. (可選)染色抗體: 如果需要，可以加入熒光偶聯(lián)的CD4抗體。在2-8℃的環(huán)境中避光孵育5分鐘。
7. 洗滌: 對于每1億細(xì)胞，加入1-2mL緩沖液，并使用300g的速度離心10分鐘。去除上清液。
8. 細(xì)胞重懸: 使用500μL緩沖液將細(xì)胞沉淀重懸，并輕輕混合，使細(xì)胞均勻懸浮。
三、磁性分選
1. 放置分選柱: 將分選柱放置在分選器的磁場中。
2. 分選柱濕潤: 將適量的緩沖液加入分選柱中，充分濕潤整個(gè)分選柱的內(nèi)部表面。對于xM規(guī)格的分選柱，加入500μL緩沖液;對于xL規(guī)格的分選柱，加入3mL緩沖液。
3. 加入細(xì)胞懸液: 將細(xì)胞懸液緩慢地加入分選柱中，確保細(xì)胞均勻分布在整個(gè)分選柱中。
4. 分選: CD4+細(xì)胞與磁珠結(jié)合，被吸附在分選柱上，未標(biāo)記的細(xì)胞會順著緩沖液流下來。加入適量的緩沖液，直至所有液體通過分選柱。三次洗滌，每次加入適量的緩沖液，等待液體全部流盡。
5. 收集未標(biāo)記細(xì)胞: 洗滌后的流出物中包含未標(biāo)記的細(xì)胞。收集這部分細(xì)胞作為未標(biāo)記細(xì)胞。(對于xM規(guī)格分選柱，收集3次500μL的流出物;對于xL規(guī)格分選柱，收集3次3mL的流出物)
6. 收集目的細(xì)胞: 將分選柱從分選器中取出，并將其放在合適的收集管上。加入適量的緩沖液到分選柱中，迅速用塞子推下，收集洗脫出的磁性標(biāo)記的CD4+細(xì)胞。對于xM規(guī)格分選柱，加入1mL緩沖液;對于xL規(guī)格分選柱，加入5mL緩沖液。
7. (可選)進(jìn)一步富集: 為了提高標(biāo)記細(xì)胞的純度，可以將洗脫的部分再次進(jìn)行磁性分選。使用新的分選柱，重復(fù)步驟1至6中描述的磁性分選過程。
以上就是使用CD4磁珠進(jìn)行細(xì)胞磁性分選的詳細(xì)操作步驟。請注意在操作過程中保持環(huán)境的清潔和無菌，并避免磁珠暴露在強(qiáng)磁場之外。
注意事項(xiàng)：
1. 磁珠應(yīng)在2-8℃的條件下避光保存，不得冷凍。
2. 除了CD4磁珠，我們公司還提供SophMag®手動(dòng)磁分選套裝，可以進(jìn)一步提高磁分選效果。搭配使用，可以獲得較好的分選結(jié)果。
CD4磁珠是一種方便快捷、高效純化CD4+細(xì)胞的工具，適用于細(xì)胞分選和純化等實(shí)驗(yàn)。無論是在科研還是臨床應(yīng)用中，都具有廣泛的應(yīng)用。需要了解更多細(xì)胞分選儀、細(xì)胞分選磁珠等相關(guān)產(chǎn)品請進(jìn)入蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行了解和咨詢。
