細(xì)胞支原體污染的原因
對于生物實驗器材細(xì)胞培養(yǎng)來說，如何預(yù)防細(xì)胞的支原體污染是每一個細(xì)胞培養(yǎng)者的都會考慮的問題，據(jù)統(tǒng)計，在細(xì)胞污染原因分析中有超過 60% 的細(xì)胞培養(yǎng)物污染都是由支原體所引起的。那么細(xì)胞支原體污染的原因有哪些呢？
細(xì)胞支原體污染的原因主要包括：
1. 不良操作：如操作者未穿實驗服、未戴口罩、未熏蒸操作臺等，容易引起污染。
支原體一般通過難以追蹤的各種來源進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)物。其中包括實驗室人員、血清、細(xì)胞培養(yǎng)基、水浴鍋、振蕩培養(yǎng)箱、生物反應(yīng)器、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等。人為污染是上述污染源中最大的污染源。污染物可以通過臟衣服、實驗室服裝、人在層流氣流附近的講話、人的頭皮、打噴嚏、咳嗽等傳播。此外，無論細(xì)胞培養(yǎng)物在哪里，人員不斷流入都會增加污染的風(fēng)險。
2. 設(shè)備污染：如使用不潔凈的實驗工具，容易引起污染。
支原體可以通過交叉污染和不良的實驗室技術(shù)從這些來源傳播。這些措施包括對多個細(xì)胞系重復(fù)使用移液器，而不是使用一次性移液器或重復(fù)使用手套。
3. 實驗環(huán)境污染：如使用不潔凈的實驗室，容易引起污染。
在層流氣流中工作時（說話或移液時）產(chǎn)生的氣溶膠也是造成污染的主要原因之一。如果細(xì)胞系長時間暴露在空氣中，產(chǎn)生的這些氣溶膠將在傳代過程中進(jìn)入培養(yǎng)基或從空氣中進(jìn)入。氣溶膠是肉眼看不見的，因此在導(dǎo)致污染之前無法檢測到。
4. 細(xì)胞容易污染：如不潔凈的培養(yǎng)基、不潔凈的細(xì)胞源、生物實驗器材等，容易引起污染。
培養(yǎng)基和血清也是細(xì)胞支原體污染的主要來源，培養(yǎng)基主要有液體培養(yǎng)基和粉末培養(yǎng)基兩種。受技術(shù)條件影響，一般支原體也會通過粉末培養(yǎng)基進(jìn)行傳播。支原體的直徑一般在0.1微米左右，而我們平時使用的除菌過濾一般孔徑為0.22微米，這種孔徑的過濾器只能起到過濾細(xì)菌的作用，多數(shù)支原體是不能過濾被過濾的。此外，組織培養(yǎng)基多數(shù)都含有指示劑，這些指示劑會因微生物污染導(dǎo)致 pH 值降低而變黃。所以通過觀察培養(yǎng)基顏色的或PH值的變化也可以判斷是否有支原體污染。
血清也是支原體污染的主要來源。通過肉眼觀察，在血清中較難發(fā)現(xiàn)支原體污染。但是對于科研實驗室來說，由于細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模較小，一瓶胎牛血清往往可以培養(yǎng)多代細(xì)胞，需要反復(fù)凍融很多次，這樣專業(yè)增加了支原體污染風(fēng)險。還有，血清一般是在高壓滅菌后才添加到培養(yǎng)基中的，因此無法保證血清無污染。
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