細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低的原因

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低的原因

 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)是指將DNA、RNA等外源物質(zhì)通過電轉(zhuǎn)染或化學(xué)轉(zhuǎn)染的方式導(dǎo)入至細(xì)胞內(nèi)的實(shí)驗(yàn)方法。不同的細(xì)胞系轉(zhuǎn)染難度也各部相同，尤其是對生長條件要求較為苛刻的細(xì)胞，比如原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率會遠(yuǎn)低于其他細(xì)胞。這里， 盤點(diǎn)了一下那些可能導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低的原因、轉(zhuǎn)染試劑選擇指南，以便提升您的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。 

一、實(shí)驗(yàn)條件和操作方法不合規(guī)
正常情況下，做細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前需要充足的準(zhǔn)備，比如：細(xì)胞、DNA、轉(zhuǎn)染試劑、培養(yǎng)基等。除了合規(guī)的實(shí)驗(yàn)條件以外，還有較為重要的就是實(shí)驗(yàn)操作方法，實(shí)驗(yàn)是一個較為嚴(yán)謹(jǐn)?shù)倪^程，所以每一步的操作步驟都要嚴(yán)格按照操作規(guī)程和說明書進(jìn)行操作，才能避免人為原因所造成的失誤。
二、細(xì)胞活性不足，細(xì)胞密度不足
細(xì)胞的生長狀態(tài)對細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率的影響較大，細(xì)胞長勢弱或者細(xì)胞的鋪板密度過低，可能會轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞毒性而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率過低，甚至轉(zhuǎn)染失敗。因此細(xì)胞轉(zhuǎn)染時機(jī)應(yīng)在細(xì)胞的對數(shù)生長期，細(xì)胞的鋪板密度一般以90%-95左右為宜。
三、轉(zhuǎn)染的DNA或RNA濃度過低、質(zhì)量過低
如果轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的DNA或RNA的純度不夠，其中的其它外源物質(zhì)可能會干擾細(xì)胞造成輕微的細(xì)胞毒性，進(jìn)而影響到細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。正常情況下，用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒濃度應(yīng)大于500ng/ul。在做RNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時，可以嘗試Lip RNAiMAX Transfection Reagent試劑，這類試劑的細(xì)胞毒性較低，轉(zhuǎn)染效率較高，并且操作簡單易于優(yōu)化，比較適用于高通量轉(zhuǎn)染。

四、細(xì)胞本身轉(zhuǎn)染難度大 
細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低的原因還跟需要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型有關(guān)。細(xì)胞類型的不同，轉(zhuǎn)染效率也會有較大差別。尤其是MSC細(xì)胞、PSC干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、原代細(xì)胞等， 對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，可以嘗試高效率的轉(zhuǎn)染試劑或者使用其他轉(zhuǎn)染方法，靈活變化。比如：使用Lipofectamine  Stem試劑。
五、轉(zhuǎn)染試劑選擇不當(dāng)
轉(zhuǎn)染試劑的選擇時保證細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵，低質(zhì)量的轉(zhuǎn)染試劑可能具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，操作過程繁雜，出現(xiàn)轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定等現(xiàn)象，遇到難轉(zhuǎn)細(xì)胞系甚至出現(xiàn)轉(zhuǎn)染失敗。實(shí)驗(yàn)室里經(jīng)常使用的LIP2000，LIP3000的轉(zhuǎn)染試采用脂質(zhì)體納米顆粒技術(shù)，能夠?qū)⑥D(zhuǎn)染的效率提升10倍作用，比較適合用于HEK293、原代細(xì)胞、干細(xì)胞等難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型，并且還具有可重復(fù)性。
        以上總結(jié)的是一些常見的影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素，可供實(shí)驗(yàn)參考，更多關(guān)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的原因 、LIP3000、LIP2000相關(guān)產(chǎn)品需求可進(jìn)入蘇州阿爾法生物網(wǎng)站。