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Lip 3000轉(zhuǎn)染試劑與Lipofectamine2000的區(qū)別

 更新時(shí)間:2022-11-17 點(diǎn)擊量:1152

Lipofectamine 3000簡(jiǎn)稱(chēng)LIP3000采用了脂質(zhì)體納米微粒技術(shù),提供了出眾的轉(zhuǎn)染性能和可重復(fù)的結(jié)果。它適用于各種難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和常見(jiàn)的細(xì)胞,在保證轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)也提高了細(xì)胞存活率。 Lipofectamine 3000試劑可以將難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率提升10倍左右,同時(shí)還可以降低細(xì)胞的死亡率。

lip3000轉(zhuǎn)染

   另外,LIP 3000還具有多功能性,在某些情況下,它甚至可以取代電穿孔,由于提升了轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的存活率,從而也簡(jiǎn)化了工作流程。盡管Lipofectamine 2000十分受歡迎,但對(duì)于某些敏感的細(xì)胞,依然存在細(xì)胞毒性。為此,在Lipofectamine 3000的開(kāi)發(fā)過(guò)程中,科學(xué)家們優(yōu)化了轉(zhuǎn)染過(guò)程的四個(gè)步驟,并結(jié)合了先進(jìn)的脂質(zhì)體納米微粒技術(shù)。所以,Lipofectamine 3000減少了試劑的用量,并降低潛在的毒性風(fēng)險(xiǎn)。

lip300轉(zhuǎn)染試劑和lip2000轉(zhuǎn)染試劑

LIP3000LIP2000的區(qū)別是什么?轉(zhuǎn)染效率如何?

    通過(guò)科學(xué)家使用這兩種試劑來(lái)轉(zhuǎn)染來(lái)自各種組織的癌細(xì)胞。研究結(jié)果證實(shí),Lipofectamine 3000試劑的轉(zhuǎn)染性能高于lip2000。使用Lipofectamine 2000,只有25%的癌細(xì)胞系被認(rèn)為是容易轉(zhuǎn)染的(轉(zhuǎn)染效率高于50%),而使用Lipofectamine 3000,這個(gè)比例高達(dá)60%。 

此外,Lipofectamine 3000還促進(jìn)了新的技術(shù),如當(dāng)下流行的基因組編輯。GeneArt TALs和CRISPR靶定了HepG2和U2OS細(xì)胞中的AAVS1位點(diǎn)。采用新的轉(zhuǎn)染試劑后,研究人員發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率、平均熒光強(qiáng)度和基因組切割改善。這些進(jìn)步可實(shí)現(xiàn)更輕松的干細(xì)胞操作,增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因的位點(diǎn)特異性插入。

什么是脂質(zhì)體? 
 脂質(zhì)體脂質(zhì)體是類(lèi)似于細(xì)胞膜的具有高親和力的囊泡,將DNA放入其中(準(zhǔn)確地說(shuō),DNA包裹在脂質(zhì)體中)并導(dǎo)入細(xì)胞。大多數(shù)脂質(zhì)體是脂質(zhì)和亞精胺衍生物結(jié)合的類(lèi)型。我嘗試了 Lipofectamin、Lipofectamin2000、Lip3000、Tlansfectine、Tlansfectum、DMRIEC、SuparFect、Fugen6、Tf-x、Do-fecto,將 Lipofectamin 與試劑結(jié)合使用?,F(xiàn)在可以轉(zhuǎn)染大多數(shù)貼壁細(xì)胞系。

LIP300轉(zhuǎn)染試劑
脂質(zhì)體的制備和轉(zhuǎn)染過(guò)程:
 待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)在前一天接種。具體轉(zhuǎn)染步驟如下: 
1. 1. 向 Opti-MEM50ul 中加入 DNA 溶液(1ug;即使在引入多個(gè)質(zhì)粒時(shí)也總共 1ug)并混合。
2. 2. 將 Plus Regent (4ul) 添加到 opti-MEM50ul 中并與 1 混合。靜置15分鐘。在此期間,將細(xì)胞更換為無(wú)血清培養(yǎng)基(不包括抗生素)。
3. 3. 將 Lipofectoamine (2ul) 添加到 opti-MEM100ul 中并與 2 混合。靜置15分鐘。用顯微鏡強(qiáng)烈放大時(shí)可以觀(guān)察到細(xì)顆粒。
4. 用新的 600 ul 無(wú)血清培養(yǎng)基更換細(xì)胞培養(yǎng)基。3. 3. 添加脂質(zhì)體并緩慢混合。
5. 2-4 小時(shí)后(2 小時(shí)即可)加入 800 ul 20% 血清培養(yǎng)基。
6. 再過(guò) 2-4 小時(shí)后,用 10% 血清培養(yǎng)基(不含抗生素)更換培養(yǎng)基。
(換液隔天重新電鍍) 
細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)的注意事項(xiàng): 
 盡量使用聚苯乙烯設(shè)備(48孔板方便)。DNA 在小量制備水平上的純化程度較低。將其與 maxi 一起使用并與 CsCl 結(jié)合,或通過(guò)用苯酚/氯仿提取 minipresed DNA 并用 EtOH 沉淀來(lái)使用它。

2. 或者,如果在步驟 3 中形成了大的團(tuán)塊,那是由于 DNA 純化程度低。如果在轉(zhuǎn)染后的第二天觀(guān)察到真菌污染,則主要認(rèn)為是從質(zhì)粒 DNA 或其管中攜帶的。更換10%血清培養(yǎng)基(不含抗生素)后,細(xì)胞在4小時(shí)左右即可恢復(fù),因此可通過(guò)更換10%血清培養(yǎng)基(含抗生素)來(lái)防止污染。 

3. 通常在轉(zhuǎn)染后24 至 72 小時(shí)觀(guān)察到轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。
 4.正常情況下峰值為48小時(shí),但當(dāng)細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)且細(xì)胞增殖能力高時(shí),表達(dá)水平會(huì)相對(duì)低于24小時(shí)。在報(bào)告基因檢測(cè)中,轉(zhuǎn)染后的第二天,需要將48孔板稀釋1/3至2/3倍并重新鋪展,貼壁培養(yǎng)。正常的核受體配體反應(yīng)在大約 8 到 12 小時(shí)內(nèi)誘導(dǎo)報(bào)告產(chǎn)物。

       蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司十三年專(zhuān)注于生物實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)試劑耗材的供應(yīng)商,主要供應(yīng)的生物試劑包括 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑、Lipofectamine 2000、LIP3000 轉(zhuǎn)染試劑盒、天根試劑盒、碧云天試劑等細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、生命科學(xué)相關(guān)的試劑及耗材,另外提供生物反應(yīng)器、發(fā)酵罐、振蕩培養(yǎng)箱、移液器、離心機(jī)、顯微鏡、純水機(jī)等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備