RNA 代表核糖核酸和 siRNA——小干擾 RNA（也稱為沉默 RNA）。siRNA 是分子中的一種短 (21-23 bp) 雙鏈 RNA 核苷酸，在細(xì)胞中發(fā)揮各種生物系統(tǒng)的功能。siRNA轉(zhuǎn)染是“轉(zhuǎn)移"，將siRNA細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中，這是一個(gè)涉及基因沉默的過程。為了成功優(yōu)化 siRNA 轉(zhuǎn)染，需要合適的轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染方法來進(jìn)行體外和體內(nèi)RNAi 實(shí)驗(yàn)。這些過程因細(xì)胞類型和轉(zhuǎn)染方法而異。對于siRNA轉(zhuǎn)染有許多針對特定細(xì)胞類型優(yōu)化的體外siRNA 轉(zhuǎn)染試劑。
siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)
體內(nèi)siRNA于siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù) 應(yīng)用是基于納米顆粒、聚合物或 脂質(zhì)體的一種技術(shù)。
科學(xué)家們發(fā)現(xiàn) siRNA 在大規(guī)模沉默基因表達(dá)和研究基因功能方面比較有價(jià)值。此類實(shí)驗(yàn)的成功通常取決于 siRNA的轉(zhuǎn)染方法?？梢允褂脙?yōu)化的 轉(zhuǎn)染試劑 和試劑盒在體外和體內(nèi)轉(zhuǎn)染 siRNA。
影響siRNA 轉(zhuǎn)染效率的因素主要包括培養(yǎng)細(xì)胞的生長狀況、轉(zhuǎn)染發(fā)生的條件、引入的轉(zhuǎn)染方法、以及實(shí)驗(yàn)中使用的 siRNA 的質(zhì)量和數(shù)量。
同時(shí)，細(xì)胞密度、體積、暴露時(shí)間和 siRNA 細(xì)胞的數(shù)量對 siRNA 轉(zhuǎn)染的成功率以及在 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中建立穩(wěn)定的 RNAi 敲低細(xì)胞系也起著重要作用。
RNAi 誘導(dǎo)的基因沉默通常用于研究培養(yǎng)細(xì)胞中的基因功能。大多數(shù)情況下，這些基因功能是由引入小干擾 RNA (siRNA) 或 microRNA (miRNA) 的介入所引起的。siRNA 分子屬于雙鏈，長度為 20-24 個(gè)堿基對，終止于具有磷酸化 5' 和羥基化 3' 末端的兩個(gè)突出核苷酸。一個(gè) miRNA 分子是單鏈的，有 22 個(gè)核苷酸長；它與 RNA 的互補(bǔ)片段結(jié)合形成雙鏈分子。這兩種分子都可能在細(xì)胞中自然產(chǎn)生，也可能是人工引入的，它們的作用可能會(huì)持續(xù)三到七天。
siRNA體內(nèi)轉(zhuǎn)染現(xiàn)狀
由于 siRNA 具有穩(wěn)定性差、遞送效率低、生物分布不正確以及靶向特定組織等缺點(diǎn)，因此體內(nèi) RNAi 研究面臨了許多技術(shù)挑戰(zhàn)。這些技術(shù)挑戰(zhàn)意味著不適宜在動(dòng)物身上進(jìn)行 大量的RNAi 實(shí)驗(yàn)。
siRNA體內(nèi)轉(zhuǎn)染主要方法：是通過 RNAi技術(shù)：即：使用 siRNA 或 miRNA 、質(zhì)粒 DNA 、病毒載體等，在體內(nèi)表達(dá)生成短鏈 RNA (shRNA)，隨后加工成活性 siRNA。一般來說，基于病毒的 shRNA 載體在體內(nèi)提供較高的遞送效率，但構(gòu)建起來比較耗費(fèi)時(shí)間，并且存在免疫原性等問題。
使用 RNAi 技術(shù)面臨的主要挑戰(zhàn)之一是成功地將穩(wěn)定的功能性 siRNA 或 microRNA 分子傳遞到目標(biāo)組織。siRNA 或 miRNA 必須克服核酸酶的降解，逃避先天免疫系統(tǒng)的檢測，從而減少脫靶效應(yīng)并被靶組織所吸收。近來研究發(fā)現(xiàn)對 siRNA 或 miRNA 進(jìn)行化學(xué)修飾可以增加它們在體內(nèi)的穩(wěn)定性。這些化學(xué)修飾維持了 siRNA 分子的效力、功效和特異性，并增加了它們在生物體動(dòng)態(tài)環(huán)境中的整體穩(wěn)定性。
目前市場上常用的siRNA轉(zhuǎn)染試劑主要有RFect 系列轉(zhuǎn)染試劑盒、Lipo2000、Lipo3000，RNAiMAX等都可以用于siRNA的體外化學(xué)轉(zhuǎn)染法。
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