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常見用于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基配比方案

 更新時(shí)間:2022-07-19 點(diǎn)擊量:2602
常見用于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基配比方案

培養(yǎng)基是生物細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)的重要營養(yǎng)基質(zhì)。動(dòng)物細(xì)胞在生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)主要采用懸浮培養(yǎng)方式,用于懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)基主要有以下幾種:


一、平衡鹽溶液:
平衡鹽溶液簡稱BSS,它在細(xì)胞培養(yǎng)過程中主要為細(xì)胞提供微量的無機(jī)鹽,起調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH、維持滲透壓平衡等作用。常用來作為洗滌液或配置稀釋培養(yǎng)基使用。實(shí)驗(yàn)中常用的平衡鹽溶液有NaCl溶液,Hanks,Earle’s平衡鹽,PBS緩沖液等。


一般情況下,配制細(xì)胞消化液或者洗滌細(xì)胞時(shí)會(huì)采用Hanks或PBS,因?yàn)檫@兩種溶液中幾乎不含鈣、鎂離子,可以減少細(xì)胞的粘附性。在密閉的培養(yǎng)器內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),多數(shù)則采用Hanks’溶液。


幾種常用的平衡鹽溶液配置方案(g/L)


名稱無Ca2+Mg2+PBS含Ca2+Mg2+PBSEarle’sHanks’D-Hanks’
NaCl8.008.006.808.008.00
KCl0.200.200.400.400.40
CaCl2--0.200.14-
MgCl26H2O-0.1---
MgSO47H2O--0.200.20-
Na2HPO41.151.15-0.0480.048
NaH2PO42H2O--0.14--
KH2PO40.200.20-0.060.06
NaHCO3--2.200.350.35
葡萄糖--1.001.00-
酚紅-
0.010.010.01

二、動(dòng)物體液、動(dòng)物組織提取液
這類培養(yǎng)基主要包含血清、淋巴液、水解蛋白等。其中血清和水解乳蛋白是實(shí)驗(yàn)中使用較多的培養(yǎng)基添加劑,同時(shí)也是細(xì)胞培養(yǎng)基中的主要營養(yǎng)成分,常使用的血清主要有胎牛血清和新生牛血清。雖然血清的營養(yǎng)成分較高,但是由于其內(nèi)部成分較為復(fù)雜,容易導(dǎo)致下游產(chǎn)物的分離、純化工序繁瑣。所以市場上逐漸出現(xiàn)合成型培養(yǎng)基,比如MEM、DMEM、PRMI1640等.
 
三、合成細(xì)胞培養(yǎng)基
合成細(xì)胞培養(yǎng)基是根據(jù)血液及細(xì)胞組成成分的研究,確定營養(yǎng)配比,將細(xì)胞生長所需要的微生物、氨基酸、微量元素及平衡鹽溶液等安一定比例配比所研發(fā)出的營養(yǎng)組合型培養(yǎng)基。此類培養(yǎng)基廣泛適用于培養(yǎng)瓶、搖瓶細(xì)胞培養(yǎng)器和生物反應(yīng)器等實(shí)驗(yàn)設(shè)備中。常用合成型細(xì)胞培養(yǎng)基配方可參考下表:

合成細(xì)胞培養(yǎng)基的配比表(mg/L)

成份(mg/L)BEMDMEMDMEM/F12199MEMRPMI1640
四水硝酸鈣-----100
氯化鈣200200116.6200200-
硫酸銅--0.0013---
九水合硝酸鐵-0.10.050.70--
七水合硫酸亞鐵--0.417---
KCL400400311.8400400400
六水合氯化鎂--28.64---
無水硫酸鎂97.6797.6748.8497.6797.6748.84
氯化鈉680064006999.5680068006000
H2NaO4P121.7108.754.35121.74121.74-
Na2HPO4--71.02--800
七水合硫酸鋅-0.432---
L-鹽酸精氨酸2184147.570126200
L-胱氨酸鹽酸鹽15.656331.292631.2965.15
L-谷氨酰胺292584365100292300
甘氨酸-3018.7550-10
L-鹽酸組氨酸154231.4821.884215
L-異亮氨酸2610554.47405250
L-亮氨酸2610559.05605250
L-鹽酸賴氨酸36.4714691.257072.540
L-甲硫氨酸7.53017.24151515
L-苯丙氨酸16.56635.48253215
L-絲氨酸-4226.2525-30
L-蘇氨酸249553.45304820
L-丙氨酸--4.4525--
L-谷氨酸--
75-20
L-門冬酰胺--7.5
-50
L-門冬氨酸-
6.6530-20
L-鹽酸半胱氨酸--17.560.11--
L-谷氨酸--7.35---
L-脯氨酸--17.25--20
L-羥脯氨酸--
10-20
L-色氨酸4169.0210105
L-酪氨酸187238.4403620
L-纈氨酸23.59452.85254620
腺嘌呤硫酸鹽---10--
腺苷酸---0.20--
ADT---1--
膽固醇---0.20--
2-脫氧-D-核糖---0.50--
無水葡萄糖100010003151100010002000
谷胱甘肽(還原型)---0.05-1
鳥嘌呤鹽酸鹽---0.30--
HEPES--3574.5---
次yellow嘌-呤--20.30--
亞油酸--0.042---
硫辛酸--0.105---
苯酚紅10158.1020105
D-核糖---0.50--
乙酸鈉---50--
胸腺嘧啶---0.30--
聚山梨酯80---20--
尿嘧啶---0.30--
yellow 嘌-呤---0.30--
V-C---0.05--
V-E---0.01--
1,4-丁二胺酸鹽--0.081---
丙酮酸鈉-11055---
D-生物素1-0.00350.01-0.2
V-D2---0.10--
泛酸鈣142.240.0110.25
氯化膽堿148.980.5013
葉酸142.650.0111
肌醇27.212.60.05235
V-K3---0.01--
煙酸---0.025--
煙酰胺142.020.02511
對(duì)氨基苯甲酸---0.05-1
鹽酸吡哆醛1420.0251-
V-B6--0.0310.025-1
V-B20.10.40.2190.010.10.2
V-B1142.170.0111
胸苷--0.365---
V-B12--0.68--0.005
V-A---0.14--
pH(無碳酸氫鈉)5.60~6.203.20~3.805.50~6.103.90~4.505.60~6.207.20~7.80
pH(加碳酸氫鈉)7.40~8.007.20~7.806.50~7.107.00~7.607.30~7.907.50~8.10
滲透壓(無碳酸氫鈉)238~263238~263265~293238~263238~263225~249
滲透壓(加碳酸氫鈉)285~315300~332284~314274~302280~310265~293




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